一文看懂蛋白質(zhì)提取液分離純化技術(shù)對比

　　一文看懂蛋白質(zhì)提取液分離純化技術(shù)對比
　　蛋白質(zhì)在組織或細胞中一般都是以復雜的混合物形式存在，每種類型的細胞都含有成千種不同的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)的分離和提純工作是一項艱巨而繁重的任務，到目前為止，還沒有一個單獨的或一套現(xiàn)成的方法能把任何一種蛋白質(zhì)從復雜的混合物中提取出來，但對任何一種蛋白質(zhì)都有可能選擇一套適當?shù)姆蛛x提純程序來獲取高純度的制品。
　　不同種類的蛋白質(zhì)在分子大小方面有一定的差別，可用一些簡便的方法，使蛋白質(zhì)混合物得到初步分離。
　　1、蛋白質(zhì)提取液分離純化透析和超濾
　　透析在純化中極為常用，可除去鹽類(脫鹽及置換緩沖液)、有機溶劑、低分子量的抑制劑等。透析膜的截留分子量為5000左右，如分子量小于10000的酶液就有泄露的危險，在純化中極為常用，可除去鹽類、有機溶劑、低分子量的抑制劑等。超濾一般用于濃縮和脫色。
　　2、離心分離置換緩沖液
　　許多酶富集于某一細胞器內(nèi)，勻漿后離心得得到某一亞細胞成分，使酶富集10~20倍，再對特定的酶進行純化。差速離心，分辨率較低，僅適用于粗提或濃縮。速率區(qū)帶法，如離心時間太長所有的物質(zhì)都會沉淀下來，故需選擇分離時間，可得到相當純的亞細胞成分用于進一步純化，避免了差速離心中大小組分一起沉淀的問題，但容量較小，只能用于少量制備。等密度梯度離心常用的離主介質(zhì)有蔗糖、聚蔗糖、氯化銫、溴化鉀、碘化鈉等等。
　　3、凝膠過濾
　　這是根據(jù)分子大小分離蛋白質(zhì)混合物有效的方法之一，注意使要離的蛋白質(zhì)分子量落在凝膠的工作范圍內(nèi)。選擇不同的分子量凝膠可用于脫鹽、置換緩沖液及利用分子量的差異除去熱源。